胚肺細(xì)胞(WI-38)介紹：胚肺細(xì)胞(WI-38)人二倍體細(xì)胞系來(lái)自妊娠3 個(gè)月的正常胚胎肺組織。該細(xì)胞系是首株用于人類疫苗制備的人二倍體細(xì)胞系。培養(yǎng)液中添加TNF alpha 可以促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。

胚肺細(xì)胞(WI-38)特性：

1） 來(lái)源：正常肺

2） 形態(tài)：成纖維細(xì)胞

3） 含量：>1x106 個(gè)/mL

4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5） 規(guī)格：T25 瓶或者1mL 凍存管包裝

運(yùn)輸和保存：使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml 凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min 后，于潔凈操作臺(tái)棄去上清，加入推薦使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm 培養(yǎng)皿或者T25 培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

胚肺細(xì)胞(WI-38)用途：僅供科研使用。

胚肺細(xì)胞(WI-38)培養(yǎng)步驟：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備MEM 培養(yǎng)基(MEM:GIBCO,貨號(hào)11095-080)；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號(hào)16000-044)，10%；PS 1%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37 攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)?/span>細(xì)胞懸液加入10cm 皿中，加入約8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞1-2 次。

2. 加2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2ml 完全培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM 條件下離心4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2 到1：5 的比例分到新的含8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

下面T25 瓶為例；

1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗瓶底1-2 次后加入1ml 胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml 完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2．1000RPM 離心5 分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO 至最終濃度為10%。加入DMSO 后迅速混勻，按每1ml 的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。明舟生物（mingzhoubio）按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106 個(gè)細(xì)胞凍存。

3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，至少2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。