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HepG2.2.15(Hep-G2/2.2.15)
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創(chuàng)e慧谷42號樓B幢401室
HepG2.2.15(Hep-G2/2.2.15)
HepG2.2.15(Hep-G2/2.2.15)
規(guī)格:
貨期:
編號:MZ-1350
品牌:Mingzhoubio
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規(guī)格:
T25瓶
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商品簡介
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產(chǎn)品名稱
HepG2.2.15(Hep-G2/2.2.15)
商品貨號
MZ-1350
中文名稱
表達HBV病毒的人肝細胞
規(guī)格
T25
組織來源
肝
形態(tài)特征
人
生長特性
貼壁生長
細胞污染
HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。
培養(yǎng)條件
MEM+480ug/mlG418+10%FBS
傳代方法
1:3~1:6傳代,每周換液2~3次
凍存條件
無血清細胞凍存液
細胞傳代步驟
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細胞復蘇步驟
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
細胞凍存步驟
待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例;1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
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